1、滅菌方法
培養基的滅菌方法主要有兩種,高壓除菌及0.22um微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比,高壓滅菌的工作強度小,成本較低,但易造成營養成分的流失,而且在多次加樣(無菌谷氨酰胺溶液,無菌碳酸氫鈉溶液等)過程中容易造成二次污染。大多數培養基采用0.1~0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾滅菌,并且已成為培養基除菌的發展方向,它可低限度地減少培養基的營養損失。
1.1 高壓滅菌
某些培養基(如MEM)可進行高壓滅菌,例如清大天一的MEM培養基中的MD605、MD609等。這類培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,一般是在培養基高壓滅菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉的無菌的液體。另外可高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。
可高壓滅菌的培養基在121℃、15psi,15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失,不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果,滅菌設備的驗證很關鍵。
1.2 過濾滅菌
可供過濾滅菌使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。一般情況下采取正壓過濾,正壓過濾較之負壓過濾具有流速高、過濾快、不易污染,可避免蛋白質產生大量氣泡等優點。一般使用過濾器可參照各供應商的產品說明書。
目前大多數實驗室和制采用微孔濾膜濾器(如Zeiss濾器)或立式微孔濾器(Millipore、Pall)除菌。微孔濾膜濾器為不銹鋼,中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。如在使用Zeiss濾器時,先要用培養用水將濾膜充分潤濕,在安裝濾膜時可在其上放置一層定性濾紙再固定。消毒時旋鈕不要扭太緊,凡與空氣接觸部位都要包好(可用牛皮紙、紗布、無紡布等);高壓滅菌后,在無菌環境中立即將旋鈕扭緊。過濾除菌結束后,要打開濾器,檢查濾膜是否完整,如果濾膜破裂,需重新進行過濾除菌過程。立式微孔濾器可以選用不同的微孔濾柱體積,因為濾膜的折疊,膜面積顯著增大,液體處理量大,而且不容易發生堵塞現象。
純化水薄膜過濾器的濾杯沒有蓋子可以嗎?
純化水薄膜過濾器的濾杯,如果沒有蓋子的話,正常使用是沒有關系的,但是如果長期存放可能對后期使用會有影響,會使水質下降。
微生物薄膜過濾器
放式兩用無菌檢查薄膜濾器。該產品具有兩種培養方法通用性的特點。設計合理,濾器過濾部分采用玻璃材質,化學性能穩定,密封度強,有效防止外源性污染,確保菌檢成功率。本儀器一次購買長期使用,每次試驗每個濾頭損耗一張濾膜,無廢物處理,符合環保(GLP)要求,貴重藥液可以回收等優點。極大節約試驗費用。本儀器不僅符合中國藥典2010年版和2005版(草案),亦可適用于英、美國及歐洲藥典.是適合國家藥品GMP認證的必備儀器。 作者:那艾儀器哥 https://www.bilibili.com/read/cv17410763?spm_id_from=333.999.0.0 出處:bilibili