微生物的實驗可以分為兩大部分：前期準(zhǔn)備和樣品檢驗。事實上，無菌檢查薄膜過濾器保持整個實驗室清潔是非常重要的， 這樣就不用在滅菌前擔(dān)心太多了， 然而， 滅菌后必須保證樣品或者培養(yǎng)基免受污染。其實， 可以把滅菌想像成”一扇門”， 在培養(yǎng)基中或者一些設(shè)備比如吸管的微生物都在滅菌過程中被殺死了，沒有微生物困擾實驗了。必須保證滅菌后的環(huán)境(門后的部分)的潔凈， 杜絕滅菌后的培養(yǎng)基和設(shè)備受到污染。無菌技術(shù)-高壓濕熱滅菌,原理:在壓力下產(chǎn)生的濕熱的蒸汽殺死微生物的營養(yǎng)體和孢子。滅菌鍋必須密閉以阻隔外部空氣， 避免空氣的存在會影響壓力并降低滅菌鍋里面的溫度。在滅菌鍋內(nèi)， 合適的滅菌溫度是通過壓力達到的， 壓力對于滅菌沒有效用但是使蒸汽溫度上升。 對于標(biāo)準(zhǔn)操作來說，15lbs/inch2時的121℃并趕走所有空氣可以達到滅菌的效果。當(dāng)?shù)竭_一定的溫度和壓力時， 需要保持一定的時間來達到效果，為了殺滅微生物，121℃必須保持至少15分鐘。大部分情況下， 實驗室配置培養(yǎng)基后應(yīng)滅菌，滅菌時應(yīng)根據(jù)供應(yīng)商指導(dǎo)， 使用合適的溫度時間； 有些培養(yǎng)基不適合滅菌的。當(dāng)滅菌器皿時，需要考慮使用數(shù)量，比如，一天用10根吸管，在滅菌時， 一般就可以以10根為一包， 這樣可以減低器皿在使用過程中遭受微生物的污染的可能性。在滅菌過程中， 可以用滅菌條來監(jiān)控效果， 滅菌條在滅菌前是有顏色的，滅菌后會變成黑色。假如一次滅菌無效， 可以重新進行滅菌過程， 但是，培養(yǎng)基是不可以進行第二次滅菌的， 應(yīng)拋棄。滅菌完成后， 培養(yǎng)基和器皿應(yīng)妥善儲存。 一般來說， 培養(yǎng)基應(yīng)存放于避光的潔凈空間，同時應(yīng)參照供應(yīng)商的指示。無菌技術(shù)–過濾，物理分離方法， 使用高效過濾將微生物從液體培養(yǎng)基分離。由于不需要加熱和冷卻過程，過濾比高溫濕熱滅菌省時間。0.2微米的過濾頭可以分離所有的細(xì)菌營養(yǎng)體, 把它安裝在針筒末端。無菌過程注意點：一旦培養(yǎng)基或者器皿經(jīng)過滅菌過程, 這種滅菌狀態(tài)應(yīng)保持直到實驗結(jié)束。最好能把培養(yǎng)基準(zhǔn)備區(qū)域(門外)和實驗區(qū)域(門內(nèi))之間應(yīng)該設(shè)有緩沖間。工作前必須消毒, 可以用70%的酒精, 也可以用含氯的消毒劑。 不管使用何種消毒劑， 需要提供充分的消毒時間來殺滅微生物，無菌檢查薄膜過濾器一般5-10分鐘， 可以用紙巾擦干表面。必須有2個光源：普通照明用和殺菌紫外光。紫外燈用于保持工作臺面免于微生物污染， 在使用前仍然需要使用消毒劑清潔。應(yīng)該有好習(xí)慣把工作桌面的物品擺放好,，把移動放到最低限度， 避免帶來污染。如果使用薄膜過濾法， 需要準(zhǔn)備一個小燒杯并有少量酒精， 鑷子不用時就放在杯子里。培養(yǎng)基使用前， 應(yīng)該有相關(guān)日期， 比如配置日期， 或者實驗室收到日期(直接使用的培養(yǎng)基)。假如沒有所需日期, 這個培養(yǎng)基不能使用。穿著干凈的實驗服， 袖子應(yīng)卷起至肘部以避免碰到培養(yǎng)基或樣品帶來污染，當(dāng)然。做實驗前要洗手。一個設(shè)計合理的實驗室能提供一個合格的環(huán)境以支持實驗?zāi)軌虬踩行У剡M行。 首先，需要為實驗室選擇一個合適的物理位置：遠離其他操作區(qū)域，比如，生產(chǎn)或者儲運；沒有從其他區(qū)域進入實驗室的直接入口；實驗室必須是微生物實驗專用；應(yīng)有專門微生物檢測無菌間，并通過緩沖間與準(zhǔn)備間等進行區(qū)隔。微生物實驗室應(yīng)該有單獨的通風(fēng)系統(tǒng), 與其他操作區(qū)域的空氣供給分開；空調(diào)系統(tǒng)的排氣必須直接排出實驗室, 空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)定時清洗, 并關(guān)注空氣過濾器的清潔。實驗室應(yīng)該是限制進入的, 可以是卡片控制或者其他方式, 只有那些被允許進入實驗室的人員才能進入。實驗室人員應(yīng)該有充足的工作區(qū)域, 從GLP標(biāo)準(zhǔn)來說, 每人應(yīng)有20平方米的區(qū)域. 充足的工作區(qū)域可以避免工作中人員的碰撞, 也避免了交叉污染。實驗室的墻面, 屋頂和門都應(yīng)該是平滑的, 光潔易于清洗消毒的；墻的接縫包括強和墻之間, 強和地面之間應(yīng)該是弧形的；任何地方都應(yīng)該不能聚集灰塵, 例如窗臺或者窗簾；柜子應(yīng)該是可移動的或者是不著地的以方便清掃。實驗室應(yīng)有充足的照明, 包括不間斷電源或者備用發(fā)電機。
