相比之下，按照 (非無菌產品的微生物計數試驗:微生物計數試驗)、 (非無菌產品的微生物計數試驗:微生物計數試驗)和 (微生物限度試驗)進行的微生物計數試驗，通過檢查回收的離散菌落對材料進行評估。類似的非藥典生物負荷試驗方法可用于工藝輸入(原材料、添加劑、加工助劑)、過程中間體(包括過程步驟，如中間過程儲存)和環境監測樣品中的微生物計數。以下兩部分簡要介紹了藥典無菌試驗、微生物計數試驗和非藥典生物負荷試驗方法，討論了它們的限制條件和與潛在數據完整性有關的基本微生物事實。在統一的藥典無菌試驗中，由訓練有素的專業微生薄膜過濾器物人員進行觀察，而不是由儀器進行觀察并記錄。這種評價方式可能會產生誤解和不一致的區分結果，并可能導致錯誤的無菌檢查結論。由于微生物人員需要在視覺上評估是否存在渾濁，可能會出現錯誤。這就要求，微生物人員除了擁有良好的視力和合適的光源外，還要了解微生物生長的變異性。當殘留產品與培養基發生反應而造成渾濁時(與膜過濾法相比，直接接種法受到的影響更大)，就會出現問題。由操作者來決定是否渾濁，每瓶加試驗菌10-100cfu，每種菌加2瓶，其中一瓶加入規定量的供試品，另一瓶作為陽性對照。按規定溫度、時間培養。如果接種后的培養基和陽性對照相比有明顯的微生物生長跡象，則說明該產品無抑菌活性或該活性已被削減到滿意的程度，無菌測試程序可以不加修改直接使用。如果加過產品并接種后的培養基和陽性對照相比生長微弱、緩慢或不生長，則說明該產品的抑菌活性在該測試條件下沒有被減弱到滿意的程度，需要對測試條件進行修改并重新驗證至該產品的抑菌活性被削減到滿意的程度。采用一種或更多的方案對無菌測試方法進行修改，重新進行驗證。每個修改方案都必須很好地存檔。只需用首次驗證時未出現生長的測試菌株，如果該菌株在修改后的測試條件下可以生長，則在同等條件下對所有的測試菌株進行驗證。如果修改方法不能使所有的測試菌株都出現生長，則采用那個使最多種測試菌株出現生長的方法。增加淋洗液、培養基的用量。用其他成分的濾膜而不用纖維薄膜過濾器素成分的濾膜( 如聚偏二氟乙烯，微生物將根據時間成幾何級數的增長，因此“微生物污染水平監測”實質也是一種時間間隔管理的實施方法。我們通過檢測藥液稀配后至滅菌前生產過程不同時段藥液的微生物數量，建立微生物隨時間的變化趨勢關系，找到達到污染控制限度的時間點，預留一定的安全時間作為內部控制時限要求。無菌藥品滅菌與滅菌前產品的微生物污染程度有關，對滅菌前微生物污染狀況進行檢控是對產品作無菌評價的先決條件。除了微生物相關要求外，必須指出，部分產品在溶液或其他狀態下存在不穩定性，極易降解，產生新的雜質，因此基于藥品化學穩定性的時間管理，也是確定存放時限的制定依據。
